流式細(xì)胞儀
產(chǎn)品名稱
流式細(xì)胞儀
管理類別
第二類
型號規(guī)格
ZS-AD6、ZS-AE7S
結(jié)構(gòu)及組成/主要組成成分
流式細(xì)胞儀由機械結(jié)構(gòu)、光學(xué)系統(tǒng)、流體系統(tǒng)、電子學(xué)系統(tǒng)、軟件系統(tǒng)組成
適用范圍/預(yù)期用途
適用于人淋巴細(xì)胞亞群的鑒定和計數(shù)
(一)流式細(xì)胞儀的主要用途:
1、分析細(xì)胞表面標(biāo)志。細(xì)胞表面的功能很復(fù)雜,是近年來分子細(xì)胞生物學(xué)研究的新域,細(xì)胞表面標(biāo)志與免疫、癌變等都有著十分密切的關(guān)系。流式細(xì)胞儀的發(fā)明可以很好進(jìn)行細(xì)胞表面標(biāo)志的分析,起到非常重要的作用。
2、分析細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)?乖悄艽碳C體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞,并與這些產(chǎn)物發(fā)生特異性反應(yīng)的物質(zhì)。通過流式細(xì)胞儀對于細(xì)胞內(nèi)的抗原物質(zhì)進(jìn)行分析可以很好地了解機體的免疫功能等。
3、分析細(xì)胞受體。細(xì)胞受體主要是同脂溶性的小信號分子相作用,流式細(xì)胞儀通過對細(xì)胞受體的分析可以幫助調(diào)節(jié)更多的基因表達(dá)。
4、分析腫瘤細(xì)胞的DNA、RNA含量。流式細(xì)胞儀通過對腫瘤細(xì)胞的DNA、RNA分析,可以判斷出病變程度,對于診斷和治療是非常有利的。
5、分析免疫細(xì)胞的功能。免疫細(xì)胞俗稱白細(xì)胞,包括淋巴細(xì)胞、吞噬細(xì)胞等,流式細(xì)胞儀通過對于人體內(nèi)的免疫細(xì)胞進(jìn)行功能的分析,可以更好的判斷出各類細(xì)胞的功能,這對于幫助人體建立良好的免疫系統(tǒng)非常有幫助。
總結(jié):流式細(xì)胞儀除了以上的主要用途之外,還被用于進(jìn)行液體的活檢,包括ddPCR、NGS、CTC、還有ctDNA等。
(二)流式細(xì)胞儀的使用及注意事項
流式細(xì)胞儀在使用,甚至在使用過程中都要精心進(jìn)行調(diào)試,以保證工作的可靠性和性。調(diào)試的項目主要是激光強度、液流速度和測量區(qū)的光路等。
(1) 激光強度調(diào)節(jié):除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長的激光出光外,還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線使激光的強度輸出為大。
(2) 液流速度調(diào)節(jié):可通過操作臺數(shù)字顯示監(jiān)督,調(diào)節(jié) 氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度。
(3) 測量區(qū)光路調(diào)節(jié):這是調(diào)試工作的關(guān)鍵。需要保證在測量區(qū)的液流、激光束、90散射測量光電系統(tǒng)垂直正交,而且交點較小。一般可在用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球等校準(zhǔn)中完成。
流式細(xì)胞術(shù)中所測得的量是相對值,因此需要在使用或使用中對系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)或標(biāo)定,這樣才能通過相對測量獲得對的意義。因而FCM中的校準(zhǔn)具有雙重功能:儀器的準(zhǔn)直調(diào)整和定量標(biāo)度。標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)該穩(wěn)定,有形成份形狀應(yīng)是大小比較一致球形,樣品分散性能良好,且經(jīng)濟、容易獲得。常用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球作為非生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品,雞血紅細(xì)胞做為生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品。
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微球用樹脂材料制作,或標(biāo)有熒光素,或不標(biāo)記熒光素。所用的雞血紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)樣品制作過程昭下:取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑:雞血=1:4),經(jīng)PBS清洗3次,再用5~10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細(xì)胞混合,室溫下振蕩醛化24h,后經(jīng)PBS再清洗,貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因為未經(jīng)熒光染色,所測光信號為雞血紅蛋白的自發(fā)熒光。
(三)流式細(xì)胞儀的操作和使用
(1) 打開電源,對系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)熱;
(2) 打開氣體閾,調(diào)節(jié) 壓力,獲得適宜的液流速度;開啟光源冷卻系統(tǒng);
(3) 在樣品管中加入去離子水,沖洗液流的噴嘴系統(tǒng);
(4) 利用校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)樣品,調(diào)整儀器,使在激光功率、光電倍增管電壓、放大器電路增益調(diào)定的基礎(chǔ)上,0和90散射的熒光強度強,并要求變異系數(shù)為。
(5) 選定流速、測量細(xì)胞數(shù)、測量參數(shù)等,在同樣的工作條件下測量樣品和對照樣品;同時選擇計算機屏上數(shù)據(jù)的顯示方式,從而能直觀掌握測量進(jìn)程;
(6) 樣品測量完畢后,再用去離子水沖洗液流系統(tǒng);
(7) 因為實驗數(shù)據(jù)已存入計算機硬盤(有的機器還備有光盤系統(tǒng),存貯量更大),因此可關(guān)閉氣體、測量裝置,而單獨使用計算機進(jìn)行數(shù)據(jù)處理;
(8) 將所需結(jié)果打印出來。
1.4.3 操作和使用中的注意事項
(1) 光電倍增管要求穩(wěn)定的工作條件,暴露的較強的光線下以后,需要較長時間的“暗適應(yīng)”以消除或降低部分暗電流本底才能工作;另外還要注意磁屏蔽;
(2) 光源不得在短時間內(nèi)(一般要1h左右)關(guān)上又打開;使用光源必須預(yù)熱并注意冷卻系統(tǒng)工作是否正常;
(3) 液流系統(tǒng)必需隨時保持液流暢通,避免氣泡栓塞,所使用的鞘流液使用要經(jīng)過過濾、消毒;注意根據(jù)測量對象的變換選用合適的濾片系統(tǒng)、放大器的類型等;
(4) 特別強度每次測量都需要對照組
更新時間:2024/11/12 13:41:15
經(jīng)營許可證號:滬寶食藥監(jiān)械經(jīng)營許20220040號
標(biāo)簽:流式 流式細(xì)胞儀 細(xì)胞儀