實時熒光定量PCR儀Real-Time PCR Instrument
產品名稱
實時熒光定量PCR儀Real-Time PCR Instrument
管理類別
第三類
型號規(guī)格
QuantStudioTM 1,QuantStudioTM 3,QuantStudioTM 5
結構及組成/主要組成成分
該產品由LED、熱循環(huán)模塊、加熱蓋、電動抽屜（QuantStudioTM 3,QuantStudioTM 5）或手動抽屜（QuantStudioTM 1）、激發(fā)和發(fā)射濾光輪、光學盒、LCD顯示器和觸摸屏、集成計算機、電源和軟件（桌面軟件版本：1.6，QuantStudioTM 3,QuantStudioTM 5儀器固件版本：1.4， QuantStudioTM 1儀器固件版本1.1）組成。
適用范圍/預期用途
該產品基于熒光標記的聚合酶鏈式反應（PCR）原理，與配套的檢測試劑共同使用，在臨床上用于對來源于人體樣本中的靶核酸進行定性或定量檢測，包括人類基因檢測項目和病原體核酸檢測項目。
（一） 實時熒光定量PCR儀Real-Time PCR Instrument
實時熒光定量pcr儀，由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成，用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數據。數據通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數據被繪制成熒光強度相對于循環(huán)數的圖表。原始數據收集后可以開始分析。實時設備的軟件能使收集到的數據進行正常化處理來彌補背景熒光的差異。正�；罂梢栽O定域值水平，這就是分析熒光數據的水平。
（二） 實時熒光定量PCR儀Real-Time PCR Instrument設備簡介
實時熒光定量PCR儀+實時熒光定量試劑+通用電腦+自動分析軟件，構成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統(tǒng)。
優(yōu)勢編輯 播報
樣品到達域值水平所經歷的循環(huán)數稱為Ct值（限制點的循環(huán)數）。域值應設定在使指數期的擴增效率為大，這樣可以獲得準確，可重復性的數據。如果同時擴增的還有標有相應濃度的標準品，線性回歸分析將產生一條標準曲線，可以用來計算未知樣品的濃度。
（三） 實時熒光定量PCR儀Real-Time PCR Instrument技術原理
所謂real-time Q-PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在 real-time 技術的發(fā)展過程中，兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關鍵的作用：（1）在90年代早期，TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn)，它能降解特異性熒光記探針，因此使得間接的檢測PCR產物成為可能。（2）此后熒光雙標記探針的運用使在一密閉的反應管中能實時地監(jiān)測反應全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結合以及相應的儀器和試劑的商品化發(fā)展導致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運用。
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數方式增加的，隨著反應循環(huán)數的增加，終PCR反應不再以指數方式生成模板，從而進入平臺期。在傳統(tǒng)的PCR 中，常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應的終擴增產物，因此用此終點法對PCR產物定量存在不可靠之處。在real-time Q-PCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴增相關的熒光信號，隨著反應時間的進行，監(jiān)測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲 線。在PCR反應早期，產生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別，而后熒光的產生進入指數期、線性期和終的平臺期，因此可以在PCR反應處于指數期的某一點 上來檢測PCR產物的量，并且由此來推斷模板初的含量。為了便于對所檢測樣本進行比較，在real-time Q-PCR反應的指數期，先需設定一定熒光信號的域值，一般這個域值（threshold）是以PCR反應的15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號 （baseline），熒光域值的缺省設置是3～15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍。如果檢測到熒光信號超過域值被認為是真正的信號，它可用于定義 樣本的域值循環(huán)數（Ct）。Ct值的含義是：每個反應管內的熒光信號達到設定的域值時所經歷的循環(huán)數。研究表明，每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的 對數存在線性關系，起始拷貝數越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線，因此只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標準曲線上計算出該樣 品的起始拷貝數。
更新時間：2024/11/12 13:41:15
經營許可證號：滬寶食藥監(jiān)械經營許20220040號
標簽：實時熒光 實時熒光定量PCR儀 定量PCR儀
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